A549细胞连续传代及生长曲线实验

◆连续传代培养实验

1. 材料及方法：细胞1:5分种，72小时传代，连续6代培养。DMEM（高糖）培养基，10%血清，  37℃、5%CO₂，T25培养瓶（透气），对照血清为 澳洲胎牛血清

2. 实验结果

2.1细胞形态

2.2 细胞计数

◆生长曲线实验

1. 材料及方法：以2×10⁴个/ml细胞浓度接种8个T25方瓶，每天取1瓶计数，绘制细胞生长曲线，三批次产品分别做三次实验，每个时间点的细胞密度取平均值，绘制曲线。澳洲胎牛血清为每次实验对照血清。

2. 实验结果

◆结果分析

1. 细胞连续六次传代，第六代72小时，Royacel与对照血清培养的A549细胞铺满率均达到98%。细胞界线清晰、形态饱满，空泡少，细胞形态无明显差异；细胞计数结果表明第三代时Royacel与对照血清细胞密度及活率无明显差异；第六代时对照血清细胞密度与第三代时相比降低13%，Royacel细胞密度与第三代无明显差异，对照血清表现出细胞增殖能力减弱的趋势，Royacel胎牛血清仍具有稳定的促细胞增殖能力，第六代时Royacel细胞密度高出对照28%，这是三代累积的结果，实际两个血清间细胞密度差异应在10%以内。两个血清在细胞活率上没有差异。

2. 通过生长曲线可知： Royacel胎牛血清和对照血清（使用同一批次做对照）细胞增殖和维持方面差别不大。 Royacel 胎牛血清各批次间细胞倍增时间及峰值浓度的偏差均＜10%。不同批次血清，观察A549细胞增殖和维持能力无明显差异；

Royacel胎牛血清在A549细胞培养方面具有良好的稳定性和连续传代能力。