质控体系

微生物

时间:2020-07-31

荣晔生物按照《荣晔生物质量管理手册》对牛血清生产过程中涉及的包材、原料、工艺用水、辐照验证等进行无菌、大肠杆菌噬菌体、支原体、细胞病毒等微生物检测,全面保障产品的生物安全。

检测项目检测方法适用环节

病毒

细胞病毒

细胞培养法成品、原料、验证

血吸附实验

免疫荧光抗体法
荧光定量PCR法

大肠杆菌噬菌体

增殖噬斑法

成品、原料、工艺用水、验证

支原体培养法

成品、原料、验证

DNA荧光染色法

PCR法

无菌

细菌

薄膜过滤法成品、PET瓶、采血袋、验证

真菌


1.细胞病毒检测

1.1 细胞培养法:

通过观察细胞形态、生长情况判断细胞病变情况,以检测致细胞病变的病毒。

1.2 红细胞吸附法:

通过观察鸡和豚鼠红细胞在细胞表面的吸附和凝集情况,检测致红细胞 凝集的病毒。

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细胞培养法-阴性

细胞培养法-阳性

红细胞吸附法-阴性

红细胞吸附法-阳性


1.3 荧光抗体法(直接法)

利用经荧光标记的特异性抗体对细胞染色,通过观察细胞有无特异性荧光,检测样品中是否含有相应的病毒抗原,具有敏感性高、特异 性强等优点,适合牛腹泻病毒、牛腺病毒、牛细小病毒、牛副流感病毒、呼肠孤病毒、狂犬病毒等病毒检测。

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荧光抗体法-REO3阴性

荧光抗体法-REO3阳性

荧光抗体法-BAV阴性

荧光抗体法-BAV阳性


1.4 荧光定量PCR法

目前最灵敏的检测方法,根据目标核酸基因设计引物,实现对靶标的检测。在PCR反应体系中加入荧光基团,通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全 程,然后通过标  准曲线对未知模板进行定量分析。


2.支原体检测

为避免单一支原体检测方法的局限性,荣晔生物结合培养法、DNA荧光染色法和PCR法对血清产品进行综合定性支原体检测。

2.1培养法

支原体检测的金标方法,药典推荐的方法,假阴性概率小,检测精度高。

2.2DNA荧光染色法

作为培养法的补充方法,通过DNA染料对样品处理过的指示细胞进行染色后,能够快速、准确地检测出细胞中支原体的污染。

2.3 PCR法

快速灵敏,特异性高。通过对支原体特定的序列设计引物,当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增,将目标DNA特异性复制,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,阳性会显示特异性大小的条带。


3.无菌性检测

采用先进的无菌隔离设备,以过氧化氢灭菌系统对检测物料进行预灭菌,为无菌检查提供完全隔离、持续有效的高洁净空间,最大限度的降低微生物污染风险,在无菌隔离器提供的无菌环境中,利用孔径为0. 22μm 的全封闭式无菌过滤系统对样品里的微生物进行截留,检测样品的无菌性 。


4.大肠杆菌噬菌体检测

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